Molecular and functional characterization of a spermidine transporter (TcPAT12) from Trypanosoma cruzi

Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas' disease, is the only eukaryotic cell which lacks the ability to synthesize polyamines de novo. In this work, we describe for the first time the molecular and biochemical properties of a high-affinity spermidine transporter from T. cruzi. The transporter gene TcPAT12 was functionally expressed in Xenopus laevis oocytes, showing high levels of spermidine uptake. Similar apparent affinity constants for spermidine uptake were obtained when comparing T. cruzi epimastigotes and heterologous expressed TcPAT12 in X. laevis. In addition, TcPAT12 also transports putrescine and the amino acid l-arginine at lower rates than spermidine.Fil: Carrillo, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Canepa, Gaspar Exequiel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Algranati, Israel David. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires. Fundación Instituto Leloir. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Buenos Aires; ArgentinaFil: Pereira, Claudio Alejandro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Molecular and functional characterization of a Trypanosoma cruzi nuclear adenylate kinase isoform

Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas’ disease, is an early divergent eukaryote in which control of gene expression relies mainly in post-transcriptional mechanisms. Transcription levels are globally up and down regulated during the transition between proliferating and non-proliferating life-cycle stages. In this work we characterized a nuclear adenylate kinase isoform (TcADKn) that is involved in ribosome biogenesis. Nuclear adenylate kinases have been recently described in a few organisms, being all related to RNA metabolism. Depending on active transcription and translation, TcADKn localizes in the nucleolus or the cytoplasm. A non-canonical nuclear localization signal was mapped towards the Nterminal of the protein, being the phosphate-binding loop essential for its localization. In addition, TcADKn nuclear exportation depends on the nuclear exportation adapter CRM1. TcADKn nuclear shuttling is governed by nutrient availability, oxidative stress and by the equivalent in T. cruzi of the mammalian TOR (Target of Rapamycin) pathway. One of the biological functions of TcADKn is ribosomal 18S RNA processing by direct interaction with ribosomal protein TcRps14. Finally, TcADKn expression is regulated by its 39 UTR mRNA. Depending on extracellular conditions, cells modulate protein translation rates regulating ribosome biogenesis and nuclear adenylate kinases are probably key components in these processes.Fil: Camara, Maria de Los Milagros. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas "Dr. Alfredo Lanari"; Argentina;Fil: Bouvier, Leon Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas "Dr. Alfredo Lanari"; Argentina;Fil: Canepa, Gaspar Exequiel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas "Dr. Alfredo Lanari"; Argentina;Fil: Miranda, Mariana Reneé. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas "Dr. Alfredo Lanari"; Argentina;Fil: Pereira, Claudio Alejandro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas "Dr. Alfredo Lanari"; Argentina

The mammalian TOR pathway is present in Trypanosoma cruzi. In silico reconstruction and possible functions

La vía TOR (“Target Of Rapamycin”) de mamíferos es una red proteica de regulación para una amplia gama de procesos involucrados en el crecimiento y la diferenciación celular, constituyendo un interruptor funcional entre el metabolismo anabólico y catabólico de la célula. El Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, tiene un ciclo de vida muy complejo con diferentes estadios morfológicos en varios hospedadores. Este ciclo de vida implica que los parásitos enfrentan grandes fluctuaciones en el medio extracelular que deben ser detectadas y a las cuales deben responder adaptando su metabolismo. Un candidato a ser el mediador entre los receptores/sensores del medio y la respuesta adaptativa celular es la vía TOR. En este trabajo integramos los datos bibliográficos de la vía TOR de organismos tripanosomátidos con un análisis in silico (simulación computacional de procesos o estructuras biológicas) del genoma del parásito. Se proponen además posibles efectores y procesos regulados por esta ruta metabólica. Teniendo en cuenta que existe muy poca información sobre los mecanismos de transducción de señales en tripanosomátidos, consideramos que el mapa presentado en este trabajo puede ser una referencia para futuros trabajos experimentales.The mammalian TOR pathway ("Target Of Rapamycin") is a regulatory protein network involved in a wide range of processes including cell growth and differentiation, providing a functional switch between anabolic and catabolic cell metabolism. Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease, has a complex life cycle with different morphological stages in various hosts. This life cycle implies that parasites have to deal with fluctuations in the extracellular medium that should be detected and counteracted adapting their metabolism. A candidate to be the mediator between the receptors / sensors of the environment and cellular adaptive response is the TOR pathway. In this paper we integrate the bibliographic data of the TOR pathway in trypanosomatids by in silico analysis (computer simulation of biological structures and processes) of the parasite's genome. Possible effectors and processes regulated by this metabolic pathway are also proposed. Given that the information on the mechanisms of signal transduction in trypanosomatids is scarce, we consider the model presented in this work may be a reference for future experimental work.Fil: Di Girolamo, Fabio Augusto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Miranda, Mariana Reneé. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Bouvier, Leon Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Cameranesi, María Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Canepa, Gaspar Exequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Pereira, Claudio Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Molecular and antigenic characterization of Trypanosoma cruzi TolT proteins

Background: TolT was originally described as a Trypanosoma cruzi molecule that accumulated on the trypomastigote flagellum bearing similarity to bacterial TolA colicins receptors. Preliminary biochemical studies indicated that TolT resolved in SDS-PAGE as ~3–5 different bands with sizes between 34 and 45 kDa, and that this heterogeneity could be ascribed to differences in polypeptide glycosylation. However, the recurrent identification of TolT-deduced peptides, and variations thereof, in trypomastigote proteomic surveys suggested an intrinsic TolT complexity, and prompted us to undertake a thorough reassessment of this antigen. Methods/Principle findings: Genome mining exercises showed that TolT constitutes a larger-than-expected family of genes, with at least 12 polymorphic members in the T. cruzi CL Brener reference strain and homologs in different trypanosomes. According to structural features, TolT deduced proteins could be split into three robust groups, termed TolT-A, TolT-B, and TolT-C, all of them showing marginal sequence similarity to bacterial TolA proteins and canonical signatures of surface localization/membrane association, most of which were herein experimentally validated. Further biochemical and microscopy-based characterizations indicated that this grouping may have a functional correlate, as TolT-A, TolT-B and TolT-C molecules showed differences in their expression profile, sub-cellular distribution, post-translational modification(s) and antigenic structure. We finally used a recently developed fluorescence magnetic beads immunoassay to validate a recombinant protein spanning the central and mature region of a TolT-B deduced molecule for Chagas disease serodiagnosis. Conclusion/Significance: This study unveiled an unexpected genetic and biochemical complexity within the TolT family, which could be exploited for the development of novel T. cruzi biomarkers with diagnostic/therapeutic applications.Fil: Lobo, Mabel Maite. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Balouz, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Melli, Luciano Jorge. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Carlevaro, Giannina Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Cortina, María Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Camara, María de los Milagros. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Canepa, Gaspar Exequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Carmona, Santiago Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Altcheh, Jaime Marcelo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Campetella, Oscar Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Ciocchini, Andres Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Agüero, Fernan Gonzalo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Mucci, Juan Sebastián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; ArgentinaFil: Buscaglia, Carlos Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas; Argentin

Functional genomics of amino acids and polyamines transporters of Trypanosoma cruzi

El trabajo en el que se basa esta tesis representa un aporte al conocimiento de nuevos elementos del metabolismo del parásito Trypanosoma cruzi. En particular, describe genes encargados de transportar metabolitos esenciales para este organismo. Pero, más que nada, es un aporte para una futura sistematización en el estudio de moléculas transportadoras. Acerca del organismo estudiado podemos describir al Trypanosoma cruzi como el agente causal de la enfermedad de Chagas, una enfermedad endémica en Argentina y en toda América Latina. Este parásito presenta numerosas características metabólicas diferenciales respecto a sus hospedadores insectos y mamíferos, siendo incapaz de sintetizar numerosos componentes celulares. Sin embargo, esta incapacidad metabólica es compensada mediante sistemas transportadores de múltiples metabolitos desde el hospedador. Luego de la reciente secuenciación del genoma de T.cruzi, se estima que existen al menos 374 genes que codifican para distintos transportadores distribuidos en tres grupos principales: canales iónicos, transportadores dependientes de ATP y transportadores secundarios. En este trabajo se estudio con énfasis a la familia de transportadores de aminoácidos denominada AAAP (Amino Acid Auxin Permease) de T. cruzi (TcAAAP). El estudio bioinformático de esta familia demostró que todos sus miembros poseen diferencias en sus extremos amino terminales pero tienen un alto nivel de identidad en el resto de sus secuencias, llegando hasta el 75% de similitud. Luego de evaluar diferentes estrategias para la correcta expresión heteróloga de estas moléculas, se encontraron exitosas las llevadas a cabos en ovocitos de Xenopus laevis y células de Saccharomyces cerevisiae. El modelo de ovocitos de Xenopus permitió identificar y caracterizar a un transportador con afinidad para la poliamina espermidina, la cual T. cruzi es incapaz de sintetizar de novo. En cuanto al estudio en diferentes modelos de levaduras, se logró expresar funcionalmente tres transportadores específicos para los aminoácidos prolina, arginina y lisina. En el caso de los dos primeros, estos pudieron ser caracterizados desde el punto de vista molecular y relacionados con datos bioquímicos previos, que integran el transporte de estos aminoácidos con el metabolismo energético del parásito. Finalmente, la permeasa de lisina fue extensamente estudiada. Se realizó una caracterización bioquímica del transporte de este aminoácido en epimastigotes en cultivo y se produjeron numerosas construcciones para su manipulación génica. Esta metodología se utilizó para comprobar la actividad y especificidad de la permeasa, además de su localización subcelular en el bolsillo flagelar, donde, probablemente, ocurre el ingreso de diversos metabolitos a la célula a través de transportadores. Por lo tanto y como se mencionó anteriormente, en este trabajo se identificaron y estudiaron por primera vez moléculas involucradas en el transporte de aminoácidos y poliaminas en Trypanosoma cruzi, nutrientes esenciales para la vida de este parásito.The work in behind this thesis represents a contribution to knowledge of new features of the metabolism of the parasite Trypanosoma cruzi. In particular, it describes genes responsible for transporting essential metabolites for this organism. But more than anything is a contribution for future systematization in the study of carrier molecules. About the studied organism Trypanosoma cruzi, it can be described as the ethiological agent of Chagas disease, endemic in Argentina and throughout Latin America. This parasite has many differential metabolic characteristics with respect to their vector insects and host mammals, being unable to synthesize many cell components. However, this metabolic inability is compensated by multiple conveyor systems of metabolites from the host. Following recent sequenciation of the T. cruzi genome, it is estimated that there are at least 374 different genes that encode transporters distributed in three main groups: ion channels, ATP-dependent and secondary transporters. In this study we focus on the amino acid transporter family called AAAP (Amino Acid Auxin permease) of T. cruzi (TcAAAP). The bioinformatic study of this family showed that all members have differences in their amino terminal but have a high level of identity in the rest of the sequences, reaching 75% of similarity. After evaluating different strategies for the successful heterologous expression of these molecules, we found that the best ones were those carried on Xenopus laevis oocytes and Saccharomyces cerevisiae cells. The model of Xenopus oocytes allowed the identification and characterization of a transporter with affinity for the polyamine spermidine, which T. cruzi is unable to synthesize de novo. Regarding the study on different models of yeast, functional expression was achieved with three transporters specific for the amino acids proline, arginine and lysine. For the first two, they could be characterized molecularly and biochemically, findings that could be related to prior data, which includes the link between transport of these amino acids to energy metabolism of the parasite. Finally, the lysine permease was extensively studied. We performed a biochemical characterization of this amino acid transport in T. cruzi epimastigotes cultures and there were produced numerous constructs in order to manipulate its gene. This methodology was used to test the activity and specificity of the permease, in addition to its subcellular localization in the flagellar pocket, where, presumably, occurs the entry of various metabolites into the cell through transporters. Therefore, and as mentioned above, in this work were identified and first studied, molecules involved in the transport of amino acids and polyamines in Trypanosoma cruzi, nutrients essential for the life of this parasite.Fil:Canepa, Gaspar Exequiel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Biochemical characterization of a low-affinity arginine permease from the parasite Trypanosoma cruzi

Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease, uses arginine for several metabolic processes, including energy reserves management. In the present work, a novel low-affinity arginine transport system has been studied. Maximum velocity (97 pmol min−1 per 107 cells), and an estimate for the apparent Km value (350 ìM) of this arginine transporter, were 6-fold and 80-fold higher respectively, when compared with the previously described high-affinity arginine transport system. This transport activity seems to be H+-mediated, presents a broad specificity by other amino acids such as methionine, and is regulated along the parasite growth curve and life cycle.Fil: Canepa, Gaspar Exequiel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Silber, Ariel. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Bouvier, León Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Pereira, Claudio Alejandro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentina. Universidade de Sao Paulo; Brasil. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Trypanosoma cruzi: Multiple nucleoside diphosphate kinase isoforms in a single cell

Nucleoside diphosphate kinases (NDPKs) are multifunctional enzymes involved mainly in the conservation of nucleotides and deoxynucleotides at intracellular levels. Here we report the characterization of two NDPKs from the protozoan parasite Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease. TcNDPK1 and TcNDPK2 were biochemically characterized presenting different kinetic parameters and regulation mechanisms. NDPK activity was mainly detected in soluble fractions according to the digitonin extraction technique; however 20% of the activity remains insoluble at digitonin concentrations up to 5mgml(-1). TcNDPK1 is a short enzyme isoform, whereas TcNDPK2 is a long one containing a DM10 motif. In addition, two other putative NDPK genes (TcNPDK3 and TcNDPK4) were detected by data mining at the T. cruzi genome database. The large number and diversity of NDPK isoforms are in agreement with those previously observed for other T. cruzi phosphotransferases, such as adenylate kinases.Fil: Miranda, Mariana Reneé. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Canepa, Gaspar Exequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Bouvier, León Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Pereira, Claudio Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Subcellular localization of Trypanosoma cruzi arginine kinase

Phosphoarginine is a cell energy buffer molecule synthesized by the enzyme arginine kinase. In Trypanosoma cruzi, the aetiological agent of Chagas’ disease, 2 different isoforms were identified by data mining, but only 1 was expressed during the parasite life cycle. The digitonin extraction pattern of arginine kinase differed from those obtained for reservosomes, glycosomes and mitochondrial markers, and similar to the cytosolic marker. Immunofluorescence analysis revealed that although arginine kinase is localized mainly in unknown punctuated structures and also in the cytosol, it did not co-localize with any of the subcelular markers. This punctuated pattern has previously been observed in many cytosolic proteins of trypanosomatids. The knowledge of the subcellular localization of phosphagen kinases is a crucial issue to understand their physiological role in protozoan parasites.Fil: Miranda, Mariana Reneé. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Bouvier, León Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Canepa, Gaspar Exequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Pereira, Claudio Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Aspartate transport and metabolism in the protozoan parasite Trypanosoma cruzi

Aspartate is one of the compounds that induce the differentiation process of the non-infective epimastigote stage to the infective trypomastigote stage of the protozoan parasite Trypanosoma cruzi. l-aspartate is transported by both epimastigote and trypomastigote cells at the same rate, about 3.4 pmol min -1 per 107 cells. Aspartate transport is only competed by glutamate suggesting that this transport system is specific for anionic amino acids. Aspartate uptake rates increase along the parasite growth curve, by amino acids starvation or pH decrease. The metabolic fate of the transported aspartate was predicted in silico by identification of seven putative genes coding for enzymes involved in aspartate metabolism that could be related to the differentiation process.Fil: Canepa, Gaspar Exequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Bouvier, León Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Urias, Ursula. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Miranda, Mariana Reneé. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Colli, W.. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Alves, M.. Universidade de Sao Paulo; BrasilFil: Pereira, Claudio Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin